今天,大學(xué)路小編為大家?guī)砹藦V東技師院校哪個(gè)好考點(diǎn) 國家公務(wù)員筆試地點(diǎn)一般在哪?,希望能幫助到廣大考生和家長,一起來看看吧!
檢驗(yàn)技師考點(diǎn):抗血清的保存
(1)經(jīng)簽定合格后的抗血清,以1:100比例加入1%的硫柳汞或5%的疊氮鈉,使其最后濃度分別為0.01%或0.05%.
(2)用無菌滴管將抗血清分裝小管,每管裝1ml左右。
(3)-20℃以下保存,可保存2年以上。
(4)如有條件可將血清冷凍干燥保存于4℃以下,保存時(shí)間更久。
制備:
1、動物的選擇
羊、馬、雞、猴、豚鼠,都是常用的免疫動物,在實(shí)驗(yàn)中,選擇動物時(shí)應(yīng)考慮抗原與動物的種屬關(guān)系、抗原性質(zhì)與動物種類、免疫血清的需要量、免疫血清的要求以及動物個(gè)體等因素。免疫用動物應(yīng)選適齡、健壯.最好為雄性。最常用的實(shí)驗(yàn)動物是家兔,一般選擇選擇年齡在6個(gè)月以上當(dāng)年繁殖的♂性,體重2 ~3公斤,健康家兔三只,免疫前用金屬編號牌固定兔耳,或用染料涂沫在動物的背部,作出明確的標(biāo)記。
2、抗原制備
1)抗原稀釋:用滅菌生理鹽水將抗原稀釋為2mg/ml,于免疫前一天加入溶液,使每毫升抗原溶液含青霉素1000 UI,鏈霉素1000 UI,放4℃過夜(一般可不加青、鏈霉素)次日取出,與佐劑混合制成乳劑后用于動物免疫。
免疫原的注射劑量應(yīng)考慮其抗原性的強(qiáng)弱、分子量大小、動物的個(gè)體狀態(tài)和免疫時(shí)間。對于純的可溶性抗原的免疫劑量,通常小鼠首次抗原劑量為50~100μg/次,大鼠為100~200μg/次,兔為100μg ~1 mg/次,合成免疫原為2 mg(半抗原約為20~200μg),一般需要與等量的福氏完全佐劑混合。加強(qiáng)免疫的劑量為首次計(jì)量的1/2,通常用不完全福氏佐劑或不用佐劑。如需制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法;反之,欲獲得高效價(jià)的抗血清,宜采用大劑量抗原長程免疫法。
2)佐劑和抗原乳劑的配制
1佐劑的配制:福氏完全佐劑(Freund’s complete adjuvant),各實(shí)驗(yàn)室的配方不盡相同,我室采用的配方如下:
醫(yī)用液體石臘 20毫升
羊毛脂 12克
水浴溶化、混勻,分裝于青霉素小瓶,用紗布、線繩扎緊瓶塞。8磅20分鐘滅菌,4℃保存?zhèn)溆?。于免疫前?zhǔn)備抗原乳劑制備時(shí),以活卡介苗(有時(shí)亦用死卡介苗)代替死結(jié)核菌,每毫升試劑中加入10mg活卡,即為福氏完全佐劑。
2抗原乳劑的制備:其方法一般有兩種,其一,將等量的完全佐劑(注意佐劑必須預(yù)先加熱融化,但不超過50℃)和抗原溶液分別吸入兩個(gè)5ml注射器內(nèi),在兩個(gè)注射器的12# 針頭間套上一根長約8~12cm的醫(yī)用無毒塑料管,將兩個(gè)注射器連接在一起(塑料管必須先經(jīng)酒精浸泡消毒,使用時(shí)取出,用滅菌生理鹽水沖洗后,與注射器針頭相連接,塑料管與針頭的口徑須合適,不能松,稍緊些為宜),針頭*塑料管約1~2cm然后由兩人相對而坐后緩緩?fù)苿俞樔?,使管?nèi)溶液進(jìn)入塑料管道至對側(cè)注射器內(nèi),每次推動針蕊時(shí)必須把管內(nèi)容物全部推出,另一側(cè)也同樣操作,使管內(nèi)液體往返混合,直至形成油包水乳劑(Water-in-oil enulsion)為止。
其二是,將等量的佐劑和抗原溶液倒入缽內(nèi),經(jīng)過反復(fù)碾磨,也可形成油包水乳劑,該法主要優(yōu)點(diǎn)是快速,可靠,不足方面主要是由于粘附過多,浪費(fèi)佐劑及抗原。
制成的乳劑是否形成油包水乳劑直接影響免疫效果,因此,必須進(jìn)行質(zhì)量檢查,檢查的方法是將制成的乳劑滴一滴在涼水(自來水)表面,質(zhì)量合格的乳劑滴入水面保持滴珠完整而不分散,不合格者進(jìn)入水面后立即擴(kuò)散,水面油亦逐漸擴(kuò)大,這就必須要繼續(xù)操作至質(zhì)量合格為止。
但有時(shí),由于佐劑的配制質(zhì)量原因,很難乳化至合格,遇有這種情況,須考慮重新配制佐劑。
3、免疫途徑,劑量和免疫周期
抗原注射途徑可根據(jù)不同抗原及試驗(yàn)要求,選用皮內(nèi)、皮下、肌肉、靜脈或淋巴結(jié)內(nèi)等不同途徑注入抗原進(jìn)行免疫。一般常采用背部、足掌·耳后等處皮內(nèi)或皮下多點(diǎn)注射。初次免疫與第二次免疫的間隔時(shí)間多為2~4周。常規(guī)免疫方案為抗原加CFA皮下多點(diǎn)注射進(jìn)行基礎(chǔ)免疫;再以免疫原加IFA作2~5次加強(qiáng)免疫,每次間隔2~3周,皮下或腹腔注射加強(qiáng)免疫。
1)常規(guī)(皮內(nèi)多點(diǎn)注射)免疫:
1第一次免疫:劑量為每只兔子注射1.0 ml抗原乳劑(含抗原量1~2mg)。注射部位為兩只后腳掌的皮內(nèi)各注射0.2 ml,其余0.6 ml分多點(diǎn)注入脊柱二側(cè),頸部,腹股溝和腋窩等處淋巴結(jié)附近部位皮內(nèi),每點(diǎn)可注入0.05ml,分12點(diǎn)注入。
2第二次免疫:初次免疫后20天左右,劑量為1.0ml/只(1~2 mg/ml),加福氏不完全佐劑。注射部位在腹部皮下多點(diǎn)注射,每點(diǎn)注入0.1 ml。
3第三次免疫:再次免疫后兩周內(nèi)進(jìn)行,注射劑量和部位同第二次免疫,免疫后7~14d抽取少許靜脈血,分離血清,試血測定效價(jià)。
2)淋巴結(jié)免疫:主要優(yōu)點(diǎn)是可減少用量。過程如下:
1卡價(jià)苗致敏:免疫前足掌皮下每側(cè)各注入活卡價(jià)苗(75 mg/ml)0.3 ml。10天左右觀察兩側(cè)?N窩淋巴結(jié),一般可腫脹如蠶豆大小,此時(shí)即可進(jìn)行淋巴結(jié)內(nèi)免疫注射。
2第一次免疫:用手指定淋巴結(jié)后在兩側(cè)?N窩淋巴結(jié)內(nèi)各注入抗原乳劑0.25ml,每只兔總量0.5 ml;為加強(qiáng)免疫,于初次免疫20天后,于腹部皮下多點(diǎn)注射不加佐劑抗原溶液1mg/1ml。
3二周后可如同第一次免疫的劑量和途徑再注射一次,一般可在第三次免疫注射前試血滴定效價(jià),效價(jià)如已達(dá)到要求可不必進(jìn)行第三次免疫。
有條件的.情況下,免疫后要加強(qiáng)動物飼料管理,如給熟黃豆飼養(yǎng)等。
3)腹腔免疫:一般不必加佐劑,適用于細(xì)胞性或顆粒性抗原,而且抗原性較強(qiáng)者,例如用綿羊紅細(xì)胞免疫家兔或小鼠即可用此法。
4、試血,測定抗體效價(jià)
一般在第三次免疫后7~10天即可于兔耳靜脈或小鼠尾尖取少量血,分離出血清之后進(jìn)行試血。
① 環(huán)狀試驗(yàn),較為經(jīng)典的方法,目前較少采用,如與20μg/ml以下的抗原于30 min內(nèi)能出現(xiàn)“艸”的沉淀環(huán),即測定抗體效價(jià)達(dá)1:5000以上時(shí)為合格。
② 免疫雙擴(kuò)散法,這是最常用的試血方法,其具體方法是,中間孔加稀釋的抗原(1mg/ml)10μl,周圍孔順時(shí)針方向加制備的抗血清分別為1:2, 1:4, 1:8,1:16,1:32和1:64,(用生理鹽水或PBS稀釋)。經(jīng)37℃保溫24h后觀察結(jié)果,效價(jià)在1:16以上即可決定放血。
5、放血
經(jīng)效價(jià)檢查合格后即可放血。放血前動物應(yīng)停食12 h,以減少血清中的脂肪含量。如擬保留該免疫動物,可直接由心臟取血,或切開耳緣靜脈滴血或心臟穿刺取血。取血后由靜脈緩緩注入等量5%葡萄溶液以補(bǔ)足失血量。取血的動物經(jīng)2~3個(gè)月休息,可再次加強(qiáng)免疫后取血。如擬一次放血致死,可用頸動脈放血的方法,各種取血方法如下。
1)心臟取血:固定動物于仰臥位置,用食指探明心臟博動量高部位(在胸骨左側(cè),由下向上數(shù)第3與第4助骨之間,指兔),剪去少許毛,用2.5% 碘酒和75%酒精消毒后,以9#針頭在預(yù)定位置與胸部呈45。角刺入心臟,微微上下移動針頭,待見血液進(jìn)入針筒后,即將注射器位置固定取血。2.5公斤體重的家兔一次可取血20~30ml。
2)耳緣靜脈滴血:先將耳緣靜脈附近的毛剪去用無菌棉球?qū)⑵つw擦干凈(不用酒精消毒,避免溶血)。用臺燈照射耳部使血管因溫度增高而擴(kuò)張,然后用無菌刀片將耳緣靜脈切一長0.5cm的縱切口,第一次切口應(yīng)從耳尖部開始,以后再切時(shí),逐步向耳根方向移動。用無菌試管或平皿收集流出的血液。如切口凝血,血流不暢時(shí),可用無菌棉棒輕輕將切口外血凝塊擦去(注意勿使切口損傷太大),血流仍可繼續(xù)流出,直至達(dá)到所需要的血量為止。取血后用無菌棉球壓迫切口止血。耳緣靜脈取血一次可取血50ml左右而動物不死。
3)頸動脈放血:使動物仰臥固定四肢,頸部剪毛、消毒后縱向切開前頸部皮膚長約10cm,用止血鉗將皮膚分開夾住,剝離皮下組織,露出肌層,用刀柄加以分離,即見搏動的頸動脈。小心將頸動脈和迷走神經(jīng)剝離長約5cm,選擇血管中段,用止血鉗夾住血管壁周圍的筋膜。遠(yuǎn)心端用絲線結(jié)扎,近心端用動脈鉗夾住,用酒精棉花球消毒血管周圍,用無菌剪刀剪一V形缺口。取長2.5cm、直徑為1.6mm塑料管一段,將一端剪成針頭樣斜面,并將此端插入頸動脈中,另一端放入200ml無菌三角瓶內(nèi),然后放開止血鉗,血即流入三角瓶內(nèi),動物流血至死,2.5公斤家兔可放血80~100ml。
6、分離血清
必須在無菌條件下進(jìn)行,待收集于平皿或三角瓶內(nèi)的血液凝固之后,用無菌滴管在無菌環(huán)境(例如超凈工作臺)中把血塊與瓶壁剝離后,放入37℃,1~2h取出后放入4℃過夜,使血清充分析出(不能冰凍,否則產(chǎn)生溶血),經(jīng)離心沉淀分出血清,放進(jìn)低溫冰箱保存。使用前必須經(jīng)過簽定合格后再分裝保存?zhèn)溆谩?
;【導(dǎo)讀】作為初級檢驗(yàn)技師,其需要掌握的基礎(chǔ)技能及知識要點(diǎn)就是采血方法及其各項(xiàng)方法之間的區(qū)別,出現(xiàn)頻率較大的就是靜脈采血法與皮膚采血法的區(qū)別是什么?為了幫助各位考生更好的了解此項(xiàng)知識點(diǎn),助力檢驗(yàn)職稱考生復(fù)習(xí),小編今天為大家整理級檢驗(yàn)技師基礎(chǔ)考點(diǎn)之采血方法,內(nèi)容如下:
靜脈采血:多采用位于體表的淺靜脈,通常采用肘部靜脈、手背靜脈、內(nèi)踝靜脈或股靜脈。
皮膚采血法:曾稱為毛細(xì)血管采血法,是采集微動脈、微靜脈和毛細(xì)血管的混合血,同時(shí)含細(xì)胞間質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)液。
皮膚采血缺點(diǎn)是易于溶血、凝血、混入組織液,而且局部皮膚揉擦、*深度不一、個(gè)體皮膚厚度差異等都影響檢查結(jié)果,所以,皮膚采血檢查結(jié)果重復(fù)性差、準(zhǔn)確性不好。
靜脈采血的操作環(huán)節(jié)多、難于規(guī)范統(tǒng)一,在移液和丟棄注射器時(shí)可能造成血液污染。靜脈采血有利于樣本收集運(yùn)送和保存,防止院內(nèi)血源性傳染病。
以上就是小編今天給大家整理分享的關(guān)于“初級檢驗(yàn)技師基礎(chǔ)考點(diǎn)之采血方法”的相關(guān)內(nèi)容,希望對各位考生有所幫助。至于檢驗(yàn)初級師多久考中級這個(gè)問題,小編認(rèn)為,一關(guān)一關(guān)過,先把初級檢驗(yàn)技師過了再說。
檢驗(yàn)技師/士考點(diǎn):尿蛋白定性試驗(yàn)方法
尿蛋白定性尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)是尿常規(guī)檢查中必做的一項(xiàng)實(shí)驗(yàn),是診斷腎臟疾病和病變的重要常規(guī)指標(biāo)之一。尿蛋白定性試驗(yàn)常通過半定量方式或加號方式檢測尿液中排出的蛋白質(zhì)的.多少,用于判斷和了解腎臟功能是否出現(xiàn)問題及問題的嚴(yán)重性,其結(jié)果可用陰性、微量、1--4個(gè)加號表示,也可用數(shù)值表示,加號越多或數(shù)值越高則尿蛋白越多。
1.試帶法
利用pH指示劑的蛋白誤差原理。本法對清蛋白較敏感,對球蛋白不敏感,僅為清蛋白的1/100~1/50,且可漏檢本周蛋白。尿液pH增高可產(chǎn)生假陽性。本法快速、簡便、易于標(biāo)準(zhǔn)化,適于健康普查或臨床篩檢。
2.加熱乙酸法
為傳統(tǒng)的經(jīng)典方法,特異性強(qiáng)、干擾因素少。能同時(shí)檢出清蛋白及球蛋白尿,但敏感度較低,一般在0.15g/L左右。本法能使含造影劑尿液變清,可用于鑒別試驗(yàn)。
3.磺基水楊酸法
又稱磺柳酸法。操作簡便、反應(yīng)靈敏、結(jié)果顯示快,與清蛋白、球蛋白、糖蛋白和本周蛋白等均能發(fā)生反應(yīng);敏感度高達(dá)0.05~0.1g/L,因而有一定的假陽性。被NCCLS作為干化學(xué)法檢查尿蛋白的參考方法,并推薦為檢查尿蛋白的確證試驗(yàn)。
;2017年檢驗(yàn)技師考試《免疫檢驗(yàn)》重要考點(diǎn)匯總
免疫檢驗(yàn)是臨床檢驗(yàn)技師考試的科目之一。你知道臨床檢驗(yàn)技師考試免疫學(xué)檢驗(yàn)都考哪些知識嗎?下面是我為大家代碼的免疫檢驗(yàn)科目考試重點(diǎn)匯總,歡迎閱讀。
免疫檢驗(yàn)科目考試重點(diǎn)匯總
0、免疫學(xué)檢測技術(shù)的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。
1、免疫:是機(jī)體識別和排斥抗原性異物的一種生理功能
2、免疫防御(對外);免疫自穩(wěn)(防自身免疫病);免疫監(jiān)視(防腫瘤)。
3、中樞免疫器官:骨髓、胸腺;外周免疫器官:淋巴結(jié)、脾臟(最大)、黏膜相關(guān)淋巴組織
4、B細(xì)胞:通過識別膜免疫球蛋白來結(jié)合抗原,介導(dǎo)體液免疫;B細(xì)胞受體=BCR=mIg
表面標(biāo)志:膜免疫球蛋白(SmIg)、Fc受體、補(bǔ)體受體、EB病毒受體和小鼠紅細(xì)胞受體。
成熟B細(xì)胞:CD19、CD20、CD21、CD22 (成熟B細(xì)胞的mIg主要為mIgM和mIgD)同時(shí)檢測CD5分子,可分為B1細(xì)胞和B2細(xì)胞。
B細(xì)胞功能檢測方法:溶血空斑形成試驗(yàn)(體液免疫功能)。
5、T細(xì)胞:介導(dǎo)細(xì)胞免疫。共同表面標(biāo)志是CD3(多鏈糖蛋白);輔助T細(xì)胞的標(biāo)志是CD4;殺傷T細(xì)胞的標(biāo)志是CD8;T細(xì)胞受體=TCR。
T細(xì)胞和NK細(xì)胞的共同表面標(biāo)志是CD2(綿羊紅細(xì)胞受體);
CD3+CD4+CD8- = 輔助性T細(xì)胞(Th)
CD3+CD4-CD8+ = 細(xì)胞毒性T細(xì)胞(Tc或CTL)(T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn))
CD4+CD25+ = 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tr或Treg)
T細(xì)胞功能檢測:植物血凝素(PHA)刀豆素(CONA)*T細(xì)胞增殖。增殖試驗(yàn)有:形態(tài)法、核素法。
T細(xì)胞亞群的分離:親和板結(jié)合分離法,磁性微球分離法,熒光激活細(xì)胞分離儀分離法
*E花環(huán)試驗(yàn)是通過檢測SRBC受體而對T細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)的一種試驗(yàn);
6、NK細(xì)胞:具有細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。直接殺傷靶細(xì)胞(腫瘤細(xì)胞和病毒感染的細(xì)胞)
表面標(biāo)志:CD16(ADCC)、CD56。
測定人NK細(xì)胞活性的靶細(xì)胞多用K562細(xì)胞株,而測定小鼠NK細(xì)胞活性則常采用YAC-1細(xì)胞株。
7、吞噬細(xì)胞包括:單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)(MPS,表面標(biāo)志CD14,包括骨髓內(nèi)的前單核細(xì)胞、外周血中的單核細(xì)胞和組織內(nèi)的巨噬細(xì)胞)和中性粒細(xì)胞。(表達(dá)MHCⅡ類分子)
8、人成熟樹突狀細(xì)胞(DC)(專職抗原呈遞功能):表面標(biāo)志為CD1a、CD11c和CD83。
9、免疫球蛋白可分為分泌型(sIg,主要存在于體液中,具有抗體功能)及膜型(mIg,作為抗原受體表達(dá)于B細(xì)胞表面,稱為膜表面免疫球蛋白)
10、免疫球蛋白按含量多少排序:IgG>IgA>IgM>IgD>IgE五類(按重鏈恒定區(qū)抗原性(CH)排序)
免疫球蛋白含量測定:單向環(huán)狀免疫擴(kuò)散法、免疫比濁法。
11、免疫球蛋白的同種型抗原決定簇位于恒定區(qū)(CH、CL)
12、抗體由漿細(xì)胞產(chǎn)生??贵w分子上VH和VL(高變區(qū))是抗原結(jié)合部位。
13、IgG:血清中含量最高的免疫球蛋白(IgG1最高),血液和細(xì)胞外液中的主要抗體。也是再次免疫應(yīng)答的主要抗體,是唯一能通過胎盤的抗體,大多數(shù)抗菌抗體、抗病毒抗體是IgG,某些自身抗體及超敏Ⅱ型抗體是IgG,免疫學(xué)檢測中第二抗體也以IgG為主。
14、IgA:分血清型(單體存在)及分泌型;分泌型IgA(sIgA)為二聚體,性能穩(wěn)定,主要存在于胃腸道、支氣管分泌液、初乳、唾液、淚液中,局部濃度高,是參與黏膜局部免疫的主要抗體。
15、IgM:為五聚體,主要存在于血液中,是Ig中分子量最大的(又稱巨球蛋白)。個(gè)體發(fā)育最早合成和分泌的抗體??乖?后體液免疫應(yīng)答中最先產(chǎn)生的抗體,感染過程中血清IgM水平升高,說明近期感染。新生兒臍血中若IgM增高,提示有宮內(nèi)感染。
16、IgE:為單體結(jié)構(gòu),正常人血清中含量最低。IgE為親細(xì)胞抗體,介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)。特異性過敏反應(yīng)和寄生蟲早期感染患者血清中可升高。
17、補(bǔ)體:具有酶樣活性的球蛋白(肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生);激活途徑主要有三種:經(jīng)典途徑(以結(jié)合抗原后的IgG或IgM類抗體為主要激活劑(雙鏈DNA),C1~C9全部參與)、替代途徑(病原微生物細(xì)胞壁成分(脂多糖)直接激活補(bǔ)體C3,然后完成C5~C9的激活過程)、MBL途徑(由急性炎癥期產(chǎn)生的甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)與病原體結(jié)合后啟動激活)。
18、補(bǔ)體系統(tǒng)中C3含量最多,C2含量最少。
19、滅活:加熱56℃30分鐘,補(bǔ)體喪失活性
20、補(bǔ)體清除免疫復(fù)合物的方式:吞噬調(diào)理;免疫粘附;免疫復(fù)合物抑制。
21、完全抗原=反應(yīng)原性+免疫原性。半抗原=反應(yīng)原性(無免疫原性)
22、抗原抗體結(jié)合力(分子間引力):靜電吸引、范德華力、氫鍵、疏水作用力(最強(qiáng))
23、抗原抗體反應(yīng)的四大特點(diǎn):特異性、可逆性、比例性、階段性;受反應(yīng)條件(如溫度、pH、電解質(zhì)、抗原抗體比例等)的影響。
24、抗體過量——前帶;抗原過量——后帶(鉤狀效應(yīng))
25、抗原抗體反應(yīng)可分為兩個(gè)階段:第一階段為抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合的階段,此階段反應(yīng)快,僅需幾秒至幾分鐘,但不出現(xiàn)可見反應(yīng);第二階段為可見反應(yīng)階段,此階段反應(yīng)慢,往往需要數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)。
26、顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應(yīng)。可溶性抗原出現(xiàn)沉淀反應(yīng)。單價(jià)抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。
27、木瓜酶水解IgG為2Fab+Fc;胃蛋白酶水解IgG為F(ab)2+nFc。
28、最常用于免疫動物的佐劑是弗氏佐劑,弗氏佐劑分為弗氏完全佐劑(弗氏不完全佐劑加卡介苗)和弗氏不完全佐劑兩種。
29、R(兔子)型抗血清是用家兔及其他動物免疫產(chǎn)生的抗體,抗原抗體反應(yīng)比例合適范圍較寬,適于作診斷試劑。
H(馬)型抗血清是用馬等大動物免疫獲得的抗體,抗原抗體反應(yīng)比例合適范圍較窄,一般用作免疫治療。
30、抗血清常見保存條件:2-8℃保存;冷凍保存(最常用);真空干燥保存(5-10年)。
31、雜交瘤細(xì)胞放入液氮(-196℃)前,需要逐步降溫。復(fù)蘇細(xì)胞時(shí),從液氮罐內(nèi)取出凍存管,立即浸入37℃水浴。
32、凝集反應(yīng)分為兩個(gè)階段:①抗原抗體的特異性結(jié)合;②出現(xiàn)可見的顆粒凝聚。
33、直接凝集反應(yīng)的原理是細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原,在適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)(0.85%氯化鈉)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集??乖?凝集原,抗體=凝集素。
34、玻片凝集試驗(yàn):主要用于抗原的定性分析,AB0血型的測定。
試管凝集試驗(yàn):肥達(dá)氏試驗(yàn)、外斐試驗(yàn)、輸血交叉配血試驗(yàn);
35、紅細(xì)胞包被抗原,用以檢測抗體的血凝反應(yīng),稱為正向間接血凝反應(yīng)(PHA)。
紅細(xì)胞包被抗體,用以檢測抗原的血凝反應(yīng),稱為反向間接血凝反應(yīng)(RPHA)。
36、間接血凝抑制試驗(yàn):可用于檢測抗體、自身抗體、變態(tài)反應(yīng)性抗體,也可測定抗原。
37、金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)
38、血凝試驗(yàn)可在微量滴定板或試管中進(jìn)行,將標(biāo)本倍比稀釋,一般為1:64,同時(shí)設(shè)不含標(biāo)本的稀釋液為對照孔。凡紅細(xì)胞沉積于孔底,集中呈一圓點(diǎn)的為不凝集。如紅細(xì)胞凝集,則分布于孔底周圍。
39、明膠凝集試驗(yàn)(間接):HIV-1抗體和抗*抗體檢測
40、抗球蛋白試驗(yàn),又稱Coombs試驗(yàn),是檢測抗紅細(xì)胞不完全抗體的一種很有用的方法。包括直接Coombs試驗(yàn)(檢測紅細(xì)胞上的不完全抗體)和間接Coombs試驗(yàn)(游離在血清中的不完全抗體)
41、沉淀反應(yīng)分兩個(gè)階段:第一階段為抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合,幾秒到幾十秒即可完成,出現(xiàn)可溶性小的復(fù)合物,肉眼不可見。第二階段為形成可見的免疫復(fù)合物,約需幾十分鐘到數(shù)小時(shí)才能完成,如沉淀線、沉淀環(huán)。
42、免疫比濁:最適pH為6.5~8.5,磷酸鹽緩沖液。
43、對流免疫電泳:抗體流向負(fù)極,抗原流向正極
44、免疫固定電泳也用予尿液中本-周蛋白的檢測及κ、λ分型,腦脊液中寡克隆蛋白的檢測及分型。
45、RIA(放免)核素(125Ⅰ)標(biāo)記抗原,競爭抑制(標(biāo)記抗原和非標(biāo)記抗原競爭*抗體);IRMA(免疫放射)核素標(biāo)記抗體,非競爭結(jié)合(過量標(biāo)記抗體,反應(yīng)速率比RIA快,靈敏度明顯高于RIA。)
RIA可以測定大分子和小分子抗原,但I(xiàn)RMA則只能測定至少有兩個(gè)抗原決定簇的抗原。
46、常用的熒光素有:異硫氰酸(FITC)黃綠色,最常用;四乙基羅丹明(RB200)橘紅色;四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)橙紅色;藻紅蛋白(R-RE)橙色。其他:銪(Eu3+)
47、熒光標(biāo)記蛋白的常用方法:攪拌法和透析法。
熒光抗體效價(jià)鑒定:抗原含量為1g/L時(shí),抗體效價(jià)>1:16
48、時(shí)間分辨熒光免疫測定(TRFIA)以鑭系元素(如:銪)化合物為熒光標(biāo)記物。
49、偏振免疫測定的偏振波長是485nm(藍(lán)光)。
50、辣根過氧化物酶(HRP):底物(1)鄰苯二胺(OPD),(2)四甲基聯(lián)苯胺(TMB) ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物。
堿性磷酸酶(ALP):底物:對-硝基苯磷酸脂(p-NPP)
β-半乳糖苷酶(β-Gal):底物:4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU)
51、異相法:先分離,后測定;均相法:不分離,直接測。
52、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA):
必要的試劑:①固相的抗原或抗體;②酶標(biāo)記的抗原或抗體;③酶反應(yīng)的底物。
抗原測定:蛋白大分子抗原用得最多的是雙抗體夾心法(HBsAg)。只有單個(gè)抗原決定簇的小分子,則使用競爭抑制法。
抗體測定:通常使用間接法(HCV、HIV)、雙抗原夾心法(HBsAb)、競爭法(HBcAb、HBeAb)和捕獲法(IgM)等
*待測孔最后顯示的顏色深淺與標(biāo)本中的待測抗原或抗體呈正相關(guān)的是:雙抗體夾心法、雙位點(diǎn)一步法、間接法測抗體;
53、化學(xué)發(fā)光底物有:直接化學(xué)發(fā)光劑:吖啶酯和三聯(lián)吡啶釕;酶促反應(yīng)發(fā)光劑:(標(biāo)記酶HRP)魯米諾及其衍生物、(標(biāo)記酶為堿性磷酸酶)AMPPD;
54、免疫印跡實(shí)驗(yàn)中常選用多克隆抗體。
55、外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離的分層液常用:Ficoll(由上到下為血漿,單個(gè)核細(xì)胞,粒,紅)和Percoll(由上至下:死細(xì)胞,單個(gè)核細(xì)胞,淋,紅,粒)。
56、純淋巴細(xì)胞群的采集有:黏附貼壁法,吸附柱過濾法,磁鐵吸引法,Percoll分離液法。
57、T細(xì)胞和B細(xì)胞的分離:E花環(huán)沉降法,尼龍毛柱分離法
58、淋巴細(xì)胞活力測定:臺盼藍(lán)染色法,死細(xì)胞為藍(lán)色。
59、CD4是HIV受體,HIV感染時(shí)CD4/CD8比值明顯降低。
60、CD4/CD8升高常見于自身免疫性疾病;而CD4/CD8降低常見于病毒感染、惡性腫瘤和再生障礙性貧血等。
61、(ELISA)雙抗體夾心法是用于細(xì)胞因子測定的最常用方法。
62、流式細(xì)胞儀:前向散射光(FS)反映顆粒的大小。側(cè)向散射光(SS)反映顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、表面的光滑程度。熒光(FL)反映顆粒被染上熒光部分?jǐn)?shù)量的多少。
63、免疫熒光標(biāo)記最常用的熒光染料:異硫氰酸熒光素(FITC)亮綠色熒光。德州紅紅色熒光。藻膽蛋白類橙色至紅色熒光。
64、臨床上常用三色熒光抗體標(biāo)記將CD3-CD16+CD56+淋巴細(xì)胞確定為NK細(xì)胞。
65、AIDS患者的一個(gè)特征性免疫診斷指標(biāo)表現(xiàn)為:T淋巴細(xì)胞總數(shù)減少,T細(xì)胞亞群CD4Th/CD8Tc比例倒置,Th/Tc<1.0,Th細(xì)胞數(shù)量顯著下降甚至測不出,而Tc細(xì)胞數(shù)量可正常或增加,NK細(xì)胞減少或活力下降,B淋巴細(xì)胞群則處于正常范圍。
65、強(qiáng)直性脊柱炎——HLA-B27
66、SLE患者以IgG、IgA升高較多見。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者以IgM增高為主。
67、M蛋白(MP)是B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞單克隆異常增殖(>30g/L)所產(chǎn)生的一種在氨基酸組成及順序上十分均一的異常單克隆免疫球蛋白。多無免疫活性,故又稱副蛋白。臨床上多見于多發(fā)性骨髓瘤、高丙種球蛋白血癥、惡性淋巴瘤、重鏈病、輕鏈病等
68、M蛋白-最基本方法:血清蛋白區(qū)帶電泳技術(shù)
M蛋白-粗篩試驗(yàn):血清免疫球蛋白定量(單向瓊脂免疫擴(kuò)散法和免疫比濁法)
M蛋白-鑒定,首選方法:免疫固定電泳(IFE)技術(shù)(區(qū)帶電泳技術(shù)與特異性抗血清的免疫沉淀反應(yīng)相結(jié)合)是臨床最常用的方法。
69、IgD降低見于原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、矽肺
70、CSF中的濃度:IgG>IgA>IgM。神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤時(shí),以IgA和IgM升高為主。
(感染、血管病變、系統(tǒng)性疾病=IgG升高)
71、本-周蛋白即尿中游離的免疫球蛋白輕鏈。尿中可測得,血中呈陰性(原因是本-周蛋白分子量小,極易迅速自腎臟排出,血中含量并不升高)
72、冷球蛋白又稱冷免疫球蛋白,在-4℃時(shí)發(fā)生沉淀,于37℃時(shí)又復(fù)溶解。采血是冷球蛋白檢測的`關(guān)鍵,宜在體溫條件下采集和保存靜脈血。
73、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT),梅毒的診斷,華氏反應(yīng)。
74、非均相熒光免疫測定:時(shí)間分辨熒光免疫測定法。
均相熒光免疫測定:熒光偏振免疫測定法。
75、鏈球菌感染:ASO(膠乳凝集試驗(yàn)、免疫散射比濁法)
76、傷寒沙門菌有菌體(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(Vi)抗原。肥達(dá)反應(yīng),效價(jià)≥1:80為陽性
77、卡氏肺孢菌,又稱卡氏肺孢子蟲,為類真菌。
78、Ⅰ型超敏反應(yīng):由特異性IgE抗體介導(dǎo)產(chǎn)生,其發(fā)生速度最快。(青霉素、支氣管哮喘)
提高Th1細(xì)胞活性,減少IL-4的分泌,可降低IgE的產(chǎn)生,阻斷IgE介導(dǎo)的Ⅰ型超敏反應(yīng)。
參與Ⅰ型超敏反應(yīng):肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞。
79、Ⅱ型超敏反應(yīng):又稱細(xì)胞毒型或細(xì)胞溶解型超敏反應(yīng),它是由靶細(xì)胞表面的抗原與相應(yīng)IgG或IgM類抗體結(jié)合后,在補(bǔ)體(細(xì)胞溶解)、巨噬細(xì)胞(吞噬)和NK細(xì)胞(ADCC作用)參與下,引起的以細(xì)胞溶解或組織損傷為主的病理性免疫反應(yīng)。(輸血反應(yīng)、新生兒溶血癥、自身免疫性溶血性貧血、藥物過敏性血細(xì)胞減少癥、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺功能亢進(jìn))
80、Ⅲ型超敏反應(yīng):由可溶性免疫復(fù)合物沉積于局部或全身多處毛細(xì)血管基底膜,通過激活補(bǔ)體,并在血小板、嗜堿性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等的參與下,引起的以充血水腫、局部壞死和中性粒細(xì)胞浸潤為主要特征的炎癥反應(yīng)和組織損傷。(Arthus反應(yīng)、類Arthus反應(yīng)、血清病、鏈球菌感染后腎小球腎炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、SLE)/81、Ⅳ型超敏反應(yīng):又稱遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH),是效應(yīng)T細(xì)胞與特異性抗原結(jié)合后,引起的以單個(gè)核細(xì)胞浸潤和組織損傷為主要特征的炎癥反應(yīng)。(細(xì)胞免疫)效應(yīng)性CD4+Th1細(xì)胞識別抗原后活化,可釋放IFN-γ、TNF、淋巴毒素(LT)、IL-3、GM-CSF、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)等多種細(xì)胞因子。
常見Ⅳ型超敏反應(yīng)性疾?。焊腥拘赃t發(fā)型超敏反應(yīng)(結(jié)核分枝桿菌、病毒、原蟲)、接觸性皮炎、移植排斥反應(yīng)。(結(jié)核菌素皮試、斑貼試驗(yàn))
82、變性的IgG可*機(jī)體產(chǎn)生抗變性IgG抗體(類風(fēng)濕因子)
83、ITP患者血清中存在有抗血小板抗體,該抗體可以縮短血小板的壽命。
84、抗乙酰膽堿受體抗體:對重癥肌無力(MG)具有診斷意義。
85、毒性彌漫性甲狀腺腫患者血清中有抗促甲狀腺激素受體(TSHR)的IgG型自身抗體。(甲狀腺功能的亢進(jìn))
86、多發(fā)性肌炎是以損害肌肉為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病,如果同時(shí)有皮膚損害,則稱為皮肌炎。
87、75%的PSS患者有抗核抗體陽性,抗Scl-70抗體是PSS的特異性抗體,80%~95%的局限性硬皮病患者抗著絲點(diǎn)抗體陽性。
88、自身免疫病(AID)的特征:高滴度自身抗體,病理特點(diǎn)為免疫炎癥損傷與抗原分布一致,能建動物模型。
89、抗DNP抗體(抗*白抗體)通常完全被DNA和組蛋白吸收,是形成狼瘡細(xì)胞的因子。
90、ANA陽性的熒光現(xiàn)象分:核膜型、均質(zhì)型、斑點(diǎn)型、核仁型。ANA常為自身免疫病的初篩試驗(yàn)。
91、ENA是可提取核抗原的總稱,分子中不含DNA。
92、抗dsDNA抗體對SLE有較高的特異性??筍m抗體也是SLE的特異性標(biāo)志之一。此兩項(xiàng)常為SLE確診指標(biāo)。(對疑為SLE的患者,應(yīng)先進(jìn)行ANA和抗dsDNA抗體的檢測,當(dāng)ANA和(或)抗dsDNA抗體陽性時(shí),再作抗ENA抗體譜的檢測。如有抗Sm抗體和(或)抗RNP抗體陽性,可實(shí)驗(yàn)室診斷為SLE)
93、抗核RNP抗體:為MCTD(混合性結(jié)締組織病)的診斷指標(biāo)。
94、抗SSA/抗SSB抗體:為干燥綜合征(SS)的診斷指標(biāo)。(當(dāng)ANA陽性而抗dsDNA抗體陰性,抗ENA抗體譜中抗SsA抗體和(或)抗ssB抗體陽性,可實(shí)驗(yàn)室診斷為干燥綜合征。)
95、抗Jo-1抗體:多發(fā)性肌炎(PM)患者常為陽性。
96、抗Scl-70抗體:進(jìn)行性系統(tǒng)性硬皮癥(PSS)的診斷指標(biāo)。
97、NCA:原發(fā)性小血管炎的特異性血清標(biāo)志物
98、內(nèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA):自身抗體有RF、抗角蛋白抗體(AKA)、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(anti-CCP)。
99、Farr法測定dsDNA抗體的特異性高,為公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)法,當(dāng)抗dsDNA抗體結(jié)合率大于20%時(shí)對SLE有意義。
100、抗線粒體抗體(AMA):原發(fā)性膽汁性肝硬化
101、巨球蛋白血癥:以分泌IgM的漿細(xì)胞惡性增殖為病理基礎(chǔ)的疾病。好發(fā)于老年男性,主要表現(xiàn)骨髓外浸潤,以肝、脾和淋巴結(jié)腫大為主要體征并伴有血黏滯過高綜合征,如表現(xiàn)為視網(wǎng)膜出血。(血清呈膠凍狀難以分離,電泳時(shí)血清有時(shí)難以泳動,集中于原點(diǎn)是該病的電泳特征)
102、異常免疫球蛋白檢測的應(yīng)用原則
初篩實(shí)驗(yàn):區(qū)帶電泳分析、免疫球蛋白定量檢測和尿本-周蛋白定性檢測。
確證實(shí)驗(yàn):免疫電泳、免疫固定電泳、免疫球蛋白亞型、血清及尿中輕鏈蛋白的定量檢測。
103、HIV誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答
1.體液免疫應(yīng)答HIV感染后,機(jī)體可產(chǎn)生:中和抗體、抗P24殼蛋白抗體、抗gp120和抗gp41抗體
2.細(xì)胞免疫應(yīng)答:CD8+T細(xì)胞應(yīng)答、CD4+T細(xì)胞應(yīng)答。
104、HIV抗原檢測:核心抗原p24(ELISA)
105、免疫印跡法判斷標(biāo)準(zhǔn)為:①HIV抗體陽性:至少有兩條膜帶(gp41/gp120/gp160)或至少一條膜帶與p24帶同時(shí)出現(xiàn);②HIV抗體陰性:無HIV抗體特異性條帶出現(xiàn);③HIV抗體可疑:出現(xiàn)HIV特異性條帶,但帶型不足以確認(rèn)陽性者。
CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)是反映HIV感染患者免疫系統(tǒng)損害狀態(tài)的最明確指標(biāo)。當(dāng)CD4+T細(xì)胞低于500/μl,則易機(jī)會性感染;低于200/μl,則發(fā)生AIDS。
106、CEA大于60μg/L時(shí)可見于結(jié)腸、胃、肺癌。手術(shù)6周后CEA水平正常。
107、AFP——原發(fā)性肝癌。PSA——前列腺癌
108、糖類抗原有:CA125:上皮性卵巢癌和*內(nèi)膜癌;CA15-3:乳腺癌;CA19-9:胰腺癌、結(jié)直腸癌。
109、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和小細(xì)胞肺癌(基因有P53,RB)的標(biāo)志物:神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)
110、排斥反應(yīng)有:宿主抗移植反應(yīng)(HVGR)和移植物抗宿主反應(yīng)(GVHR)。
111、移植物存活與HLA配型的關(guān)系是:①供、受者HLA-A和HLA-B相配的位點(diǎn)數(shù)越多,移植物存活幾率越高;②供、受者HLA-DR位點(diǎn)相配更重要,因?yàn)镠LA-DR和HLA-DQ基因有很強(qiáng)的連鎖不平衡,DR位點(diǎn)相配的個(gè)體,通常DQ位點(diǎn)也相配;③不同地區(qū)HLA匹配程度與移植結(jié)果的關(guān)系有著不同的預(yù)測價(jià)值。
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